Come scongelare e seminare epatociti primari - Video Guida
Table of Contents
- Introduzione 🌟
- Strumenti per la ricerca scientifica 🧪
- Procedure preliminari 🧤
- Preparazione del bagno d'acqua a 37 gradi Celsius 🔬
- Riscaldamento del mezzo di coltura appropriato per l'applicazione 💧
- Preparazione del mobile biologico per lo scongelamento e la semina 🧫
- Scongelamento delle epatociti criopreservate 🧊
- Rimozione delle epatociti criopreservate dal luogo di conservazione ❄️
- Scongelamento delle epatociti in fiale 🔍
- Preparazione del mezzo di scongelamento e sospensione delle cellule 🧪
- Conteggio delle cellule 🗂️
- Utilizzo del metodo di esclusione del blu di tripano per calcolare la vitalità e il rendimento delle epatociti 🔬
- Conteggio manuale delle cellule per ottenere risultati più accurati 📊
- Semina delle epatociti 🌱
- Determinazione del volume di mezzo di semina da aggiungere in base alla densità cellulare desiderata 🧫
- Trasferimento delle epatociti su una piastra multi-benicellare rivestita di collagene 🧪
- Movimentazione delle piastre per garantire una distribuzione uniforme delle cellule 🔄
- Manutenzione delle cellule 🏭
- Sostituzione del mezzo di semina con mezzo di mantenimento caldo 🌡️
- Utilizzo di un sovrapposizione per piastre particolari ❗
- Sostituzione del mezzo di mantenimento giornaliero 💦
- Supporto scientifico 📞
Introduzione 🌟
Benvenuti nel mondo delle soluzioni di bioscienza di Lonza! Facendo parte del segmento farmaceutico e biotecnologico di Lonza, forniamo ai ricercatori nel campo delle scienze biologiche gli strumenti necessari per lo sviluppo e la prova di terapie, sia durante la fase di ricerca di base che nel prodotto finale. Il nostro impegno è di supportare gli scienziati fornendo cellule epatiche di alta qualità e istruzioni tecniche esperte sull'utilizzo dei nostri prodotti.
Strumenti per la ricerca scientifica 🧪
La ricerca scientifica richiede strumenti appositi per condurre studi accurati e significativi. Forniamo una gamma di strumenti di alta qualità, inclusi epatociti, che sono fondamentali per gli studi nel campo delle scienze biologiche. I nostri strumenti sono progettati per fornire risultati affidabili e riproducibili, consentendovi di studiare in modo efficace il funzionamento delle cellule epatiche e sviluppare terapie innovative.
Procedure preliminari 🧤
Prima di iniziare la procedura di scongelamento e semina delle epatociti, è importante seguire alcune procedure preliminari per garantire la sicurezza e l'efficacia del processo. Preparate un bagno d'acqua a 37 gradi Celsius per mantenere le condizioni termiche ottimali durante la procedura. Riscaldate il mezzo di coltura appropriato per la vostra specifica applicazione nel bagno d'acqua. Assicuratevi di preparare il mobile biologico per lo scongelamento e la semina, seguendo le linee guida indicate nel protocollo.
Scongelamento delle epatociti criopreservate 🧊
Il scongelamento corretto delle epatociti criopreservate è essenziale per garantire l'integrità delle cellule. Aprite la fiala contenente le epatociti e immergetela nel bagno d'acqua verticalmente, assicurandovi che il tappo rimanga sopra il livello dell'acqua per evitare contaminazioni. Lasciate la fiala scongelarsi per 90-120 secondi, assicurandovi che rimanga la formazione di un sottile acquoso spindle. Successivamente, trasferite le epatociti scongelate nella cappa di sicurezza biologica e preparate un mezzo di scongelamento.
Conteggio delle cellule 🗂️
Per ottenere risultati affidabili, è necessario eseguire il conteggio delle cellule epatiche scongelate. Utilizzando il metodo di esclusione del blu di tripano, potete determinare la vitalità e il rendimento delle cellule. Il conteggio manuale delle cellule è preferibile per ottenere risultati accurati. Contate attentamente le cellule utilizzando un microscopio e applicate la formula appropriata per ottenere i risultati.
Semina delle epatociti 🌱
La semina delle epatociti è un passo cruciale nel processo di coltura cellulare. Utilizzando la formula fornita nel protocollo, calcolate il volume di mezzo di semina da aggiungere al vostro pool di cellule al fine di ottenere la densità cellulare desiderata. Trasferite le epatociti sulla piastra multi-benicellare rivestita di collagene, seguendo le linee guida indicate nel protocollo. Assicuratevi che le cellule siano distribuite uniformemente, agitando delicatamente la piastra.
Manutenzione delle cellule 🏭
Per mantenere la vitalità delle cellule nel corso del tempo, è importante sostituire regolarmente il mezzo di coltura. Seguite il protocollo fornito per determinare il volume e la frequenza di sostituzione del mezzo di mantenimento. Se state utilizzando un sovrapposizione per piastre particolari, preparate il mezzo di mantenimento raffreddato e seguite le istruzioni fornite per la preparazione e l'applicazione dell'overlay.
Supporto scientifico 📞
Il nostro team di supporto scientifico è disponibile per rispondere a eventuali domande o fornire assistenza. Non esitate a contattarci per ricevere ulteriori informazioni o supporto durante le vostre ricerche scientifiche."""
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