Så här tinat och planterat primära hepatocyter | Video protokoll

Så här tinat och planterat primära hepatocyter | Video protokoll

Innehållsförteckning

1. Introduktion
2. Lanza Bioscience Solutions
3. Att tina och plantera kryo-konservrad celler
4. Förberedelser
5. Tining av kryo-konservrad hepatocyter
6. Beräkning av cellens livsduglighet och utbyte
7. Plantering av hepatocyter
8. Underhåll och inkubering
9. Användning av överlagring för plattor med överlagring
10. Daglig underhåll och skötsel
11. Kontakta vårt vetenskapliga supportteam

Värdefulla råvaror för lyckad tining och plantering av hepatocyter

Hepatocyter spelar en avgörande roll inom läkemedelsforskning och kan användas för att utveckla och testa nya läkemedel. Lonza Bioscience Solutions är en del av Lanzas pharma- och biotekniksegment och syftar till att tillhandahålla forskare inom livsvetenskapen verktygen de behöver för att framställa och testa terapeutika från grundläggande forskning till färdiga produkter.

Introduktion

När det gäller användning av kryo-konservrade hepatocyter är det nödvändigt att följa en strikt protokoll för att få optimala resultat. I denna guide kommer vi att gå igenom processen för tining och plantering av hepatocyter och ge dig värdefulla tips för att uppnå bästa möjliga resultat.

Lanza Bioscience Solutions

Lanza Bioscience Solutions är ledande inom forskning av cellodlingsprodukter och tillhandahåller högkvalitativa hepatocytkulturer och tekniska instruktioner för deras användning. Vi är engagerade i att stödja vetenskapsmän genom att erbjuda högkvalitativa produkter och expertkunskap för att säkerställa framgångsrik experimental forskning.

Att tina och plantera kryo-konservrad celler

Innan du börjar med protokollet att tina och plantera kryo-konservrade hepatocyter är det viktigt att förbereda din biologiska säkerhetsbänk. Se till att du har alla nödvändiga reagenser och förnödenheter till hands.

Förberedelser

1. Förbered ett 37-graders vattenbad.
2. Värm det lämpliga mediet för din applikation i vattenbadet.
3. Desinficera koniska tuber som innehåller mediet och överför dem till den biologiska säkerhetsbänken.

Tining av kryo-konservrad hepatocyter

1. Ta snabbt bort kryo-konservrad hepatocyter från deras lagringsplats och sänk vialen vertikalt i vattenbadet. Se till att korken på vialen förblir över vattenlinjen för att undvika eventuell kontaminering.
2. Tina vialen i 90 till 120 sekunder. Vialen tinar utifrån och in och ska bilda en spindel. En tunn is-spindel bör helst vara kvar.
3. Desinficera vialen och överför den till den biologiska säkerhetsbänken.

Beräkning av cellens livsduglighet och utbyte

Använd tripanblå uteslutningsmetoden för att beräkna livsdugligheten och utbytet av dina hepatocyter. Manuell räkning är att föredra eftersom det ger de mest exakta resultaten.

Plantering av hepatocyter

Använd de formler som finns i protokollet för att beräkna mängden planteringsmedium som ska tillsättas till din befintliga cellstock för att uppnå önskad celltäthet. Överför hepatocyterna till en kollagenbelagd multiwell-platta med hjälp av en en milliliter pipettor.

Underhåll och inkubering

Placera plattan i en 37-graders koldioxidinkubator för att säkerställa jämn fördelning av cellerna. Skaka plattan i en sydöst-västlig rörelse vid 15, 30, 45 och 60 minuters intervaller efter plantering.

Användning av överlagring för plattor med överlagring

Om du använder en överlagring för dina plattor måste du följa en annan procedur. Ersätt respektive medium med varmt underhållsmedium eller applikationsspecifikt medium.

Dagligt underhåll och skötsel

Se till att ersätta underhållsmedium dagligen enligt de angivna volymerna i protokollet. Om du behöver ytterligare hjälp eller råd, tveka inte att kontakta vårt vetenskapliga supportteam.

FAQ (Vanliga frågor)

Fråga: Hur länge behöver jag inkubera hepatocyterna efter plantering? Svar: Det rekommenderas att inkubera hepatocyterna i minst fyra till sex timmar.

Fråga: Vilken metod rekommenderas för att beräkna cellens livsduglighet och utbyte? Svar: Tripanblå uteslutningsmetoden rekommenderas för att beräkna hepatocyternas livsduglighet och utbyte.

Fråga: Vilken typ av platta ska jag använda för plantering av hepatocyter? Svar: En kollagenbelagd multiwell-platta rekommenderas för plantering av hepatocyter.

Fråga: Hur ofta ska jag byta underhållsmediet för hepatocyterna? Svar: Underhållsmediet bör bytas dagligen enligt angivna volymer i protokollet.

Källor: Lonza Bioscience Solutions