Cách rã đông và cấy tế bào gan chính | Video Hướng dẫn

Mục lục

1. Giới thiệu về Lonza Bioscience Solutions
2. Chuẩn bị trước khi sử dụng
3. Quy trình rã đông và cấy tế bào gan
   • 3.1. Rã đông tế bào gan đã đông lạnh
   • 3.2. Chuẩn bị môi trường rã đông
   • 3.3. Trắc địa số lượng tế bào
   • 3.4. Cấy tế bào gan
4. Sử dụng môi trường dưỡng cư và bảo quản
   • 4.1. Môi trường dưỡng cư sau khi cấy tế bào
   • 4.2. Bảo quản và nuôi cấy tế bào

🧪 Giới thiệu về Lonza Bioscience Solutions

Lonza Bioscience Solutions là một phần của phân khúc dược phân tử và công nghệ sinh học của Lonza. Chúng tôi cung cấp các công cụ cần thiết cho nhà nghiên cứu khoa học để phát triển và kiểm tra các phương pháp điều trị từ nghiên cứu cơ bản đến sản phẩm cuối cùng. Chúng tôi cam kết hỗ trợ các nhà khoa học bằng cách cung cấp tế bào gan chất lượng cao và hướng dẫn kỹ thuật chuyên gia về việc sử dụng sản phẩm của chúng tôi.

📝 Chuẩn bị trước khi sử dụng

Trước khi sử dụng tế bào gan, hãy đọc kỹ quy trình rã đông và cấy tế bào gan đã đông lạnh trong toàn bộ để đảm bảo hiểu rõ quy trình. Hãy chắc chắn chuẩn bị tủ an toàn sinh học của bạn để rã đông và cấy tế bào. Dưới đây là danh sách các reagent và thiết bị mà bạn sẽ cần sử dụng:

• Tủ an toàn sinh học
• Nước ấm ở nhiệt độ 37 độ C
• Môi trường tương ứng
• Lọ nón chứa tế bào gan đã đông lạnh
• Ống nghiêng 50 ml chứa môi trường rã đông
• Máy ly tâm
• Dung dịch trừ khuẩn

💉 Quy trình rã đông và cấy tế bào gan

3.1 Rã đông tế bào gan đã đông lạnh

Để rã đông tế bào gan đã đông lạnh, hãy làm theo các bước sau:

1. Đặt lọ tế bào vào nước ấm 37 độ C. Hãy đảm bảo rằng nước chìm cả lọ, chỉ để đầu nón lọ phía trên mực nước để tránh nhiễm khuẩn.
2. Rã đông lọ tế bào trong khoảng thời gian từ 90 đến 120 giây. Lọ sẽ rã đông từ bên ngoài vào bên trong, tạo thành một trụ giáp băng mỏng. Hãy chắc chắn giáp băng mỏng còn lại sau khi quá trình rã đông hoàn tất.
3. Khử trùng lọ chứa tế bào và đặt lọ vào tủ an toàn sinh học.

3.2 Chuẩn bị môi trường rã đông

Chuẩn bị môi trường rã đông bằng cách làm theo các bước sau:

1. Rút bỏ bọt khí có thể xuất hiện trong dung dịch.
2. Hãy chắc chắn rằng tất cả tế bào gan đã được chuyển vào ống nghiêng 50 ml chứa môi trường rã đông.
3. Lắc nhẹ ống 50 ml một vài giây để hòa tan tế bào vào dung dịch.

3.3 Trắc địa số lượng tế bào

Sử dụng phương pháp loại trừ Thử tripan để tính toán tỉ lệ sống và hiệu suất của tế bào gan của bạn. Đếm tế bào bằng tay sẽ cung cấp kết quả tỉ lệ sống và hiệu suất chính xác nhất.

3.4 Cấy tế bào gan

Sử dụng các công thức được tìm thấy trong quy trình để xác định lượng môi trường cấy thêm vào lượng tế bào hiện tại của bạn để đạt được mật độ tế bào mong muốn. Sử dụng pipet 1 ml, chuyển tế bào gan vào một đĩa nhiều ô được phủ collagen. Tham khảo quy trình để biết obj1_lượng nguồn tế bào cần được thêm vào mỗi ô và ước lượng tế bào trong mỗi ô. Đặt đĩa vào một ổ incubator CO2 ở 37 độ C để đảm bảo tế bào được phân phối đều.

🧪 Sử dụng môi trường dưỡng cư và bảo quản

4.1 Môi trường dưỡng cư sau khi cấy tế bào

Sau khi cấy tế bào gan, hãy sử dụng môi trường dưỡng cư theo hướng dẫn sau:

• Nếu bạn không sử dụng lớp phủ, thay thế môi trường cấy tế bào bằng môi trường dưỡng cư ấm hoặc môi trường đặc thù cho mục đích sử dụng.
• Nếu bạn sử dụng lớp phủ, làm lạnh môi trường dưỡng cư và để ngoài băng. Sử dụng quy trình để xác định lượng môi trường dưỡng cư cần để cho ổ cấy của bạn và tìm nồng độ protein cần thiết của lớp phủ matrix từ tài liệu quy định. Thêm lượng matrix lớp phủ đã tính toán vào môi trường dưỡng cư đã làm lạnh và thay thế môi trường cấy tế bào bằng môi trường dưỡng cư đã chuẩn bị.

4.2 Bảo quản và nuôi cấy tế bào

Để bảo quản và nuôi cấy tế bào gan, hãy tuân theo các bước sau:

• Thay thế môi trường dưỡng cư hàng ngày theo các khối lượng tương ứng được chỉ định trong quy trình.
• Nếu bạn không sử dụng lớp phủ, thay thế môi trường dưỡng cư đến tất cả các ô cấy.
• Nếu bạn sử dụng lớp phủ, thay thế môi trường dưỡng cư theo khối lượng đã tính toán cho mỗi ô và theo hướng dẫn về thể tích mỗi ô trong quy trình.
• Hãy liên hệ với đội hỗ trợ khoa học của chúng tôi nếu bạn cần giúp đỡ trong quá trình sử dụng sản phẩm.

🙋🏻‍♂️ Câu hỏi thường gặp (FAQs)

Q: Làm thế nào để rã đông tế bào gan một cách an toàn? A: Đặt lọ tế bào trong nước ấm 37 độ C và chắc chắn rằng đầu nón lọ nằm trên mực nước để tránh nhiễm khuẩn.

Q: Có cần kiểm tra số lượng tế bào sau khi rã đông? A: Đúng, bạn nên sử dụng phương pháp loại trừ Thử tripan để tính toán tỷ lệ sống và hiệu suất của tế bào gan.