高质量肝细胞解冻和培养指南

目录

1. 引言
2. Lonza 生物科学解决方案
3. 提供的工具和支持
4. 主要肝细胞解冻和培养概要
5. 需要的试剂和耗材
6. 解冻肝细胞
7. 细胞计数
8. 培养肝细胞
9. 基质添加与维护培养基
10. 问题解答

引言

在生命科学研究中，肝细胞起着重要的作用，它们被广泛应用于药物研发和治疗方案的评估。本文将介绍 Lonza 生物科学解决方案提供的高质量肝细胞及其解冻和培养的详细步骤。

Lonza 生物科学解决方案

Lonza 生物科学解决方案是 Lonza 公司的一部分，该公司专注于制药和生物技术领域。他们提供具有高质量的工具，以帮助研究人员开发和测试治疗药物，从基础研究到最终产品的发布。Lonza 生物科学解决方案致力于通过提供高质量肝细胞和对产品使用的专业技术说明来支持科学家。

提供的工具和支持

在进行肝细胞解冻和培养实验前，请确保阅读完整的肝细胞解冻和培养协议，并准备好生物安全柜和所需试剂和耗材。下面是进行实验所需的一些重要步骤和注意事项：

主要肝细胞解冻和培养概要

1. 准备一个 37 摄氏度的水浴。
2. 在水浴中加热适当的培养基。
3. 快速从存储位置中取出冻存肝细胞，垂直浸入水浴中。
4. 解冻 90 到 120 秒，确保薄冰柱仍然可见。
5. 用消毒液处理冻存盖子并转移到生物安全柜中。
6. 准备解冻培养基。
7. 用解冻培养基重新悬浮细胞。
8. 离心细胞，去除上清液。
9. 加入适当的培养基。
10. 进行细胞计数。
11. 将肝细胞转移到有胶原贴膜的多孔板中。
12. 在合适的温度和CO2条件下培养肝细胞。
13. 根据需要添加基质和维护培养基。

需要的试剂和耗材

在进行肝细胞解冻和培养实验之前，您需要准备以下试剂和耗材：

• 适当的培养基
• 冻存肝细胞
• 水浴
• 培养皿
• 试管
• 离心机
• 细胞染色试剂

请确保按照协议中的详细说明操作。

解冻肝细胞

按照以下步骤解冻肝细胞：

1. 将冻存肝细胞放入 37 摄氏度的水浴中。
2. 在 90 到 120 秒内解冻肝细胞。
3. 消毒冻存盖子，将其转移到生物安全柜中。
4. 准备解冻培养基。
5. 用解冻培养基重新悬浮细胞。
6. 离心细胞，去除上清液。
7. 添加适当的培养基。

请务必按照协议中的时间和温度要求进行操作，以确保解冻过程的顺利进行。

细胞计数

使用三苯胺蓝染料法进行细胞计数，以计算肝细胞的存活率和产量。由于许多物种的肝细胞具有双核，所以手动计数是首选的，可以提供最准确的存活率和产量结果。

培养肝细胞

按照以下步骤进行肝细胞的培养：

1. 使用协议中的公式确定添加到当前细胞库中的培养基体积，以达到所需的细胞密度。
2. 使用 1 毫升移液器将肝细胞转移到有胶原贴膜的多孔板中。
3. 根据协议中的指南，向每个孔添加适量的细胞悬浮液。
4. 将板放入 37 摄氏度的 CO2 孵化器中。
5. 务必以南北方向和东西方向的摇动方式均匀分散细胞。
6. 在培养 15、30、45 和 60 分钟后，重复摇动步骤。
7. 根据协议中的指导，添加适量的培养基来完成培养过程。

确保按照协议要求的时间和条件进行培养，并根据实验需要来决定是否需要添加基质和维护培养基。

基质添加与维护培养基

根据实验需要，可能需要添加基质和维护培养基。根据所使用的基质规格表上的蛋白质浓度，使用协议中的公式确定所需的基质量。将基质加入冷藏的维护培养基中，并根据协议中的指导将其添加到培养板中。

在添加基质和维护培养基后，根据协议中的要求每天更换维护培养基。

问题解答

Q: 解冻肝细胞是否需要特殊设备支持？ A: 解冻肝细胞需要一个 37 摄氏度的水浴和一个生物安全柜。

Q: 如何计算肝细胞的存活率和产量？ A: 使用三苯胺蓝染料法进行细胞计数可以计算肝细胞的存活率和产量。

Q: 是否可以在多孔板中培养肝细胞？ A: 是的，在有胶原贴膜的多孔板中培养肝细胞可以使细胞更加附着和稳定。

Q: 是否需要添加基质和维护培养基？ A: 根据实验需要，可能需要添加基质和维护培养基。请参考协议中的说明进行操作。

Q: 怎样更换维护培养基？ A: 根据协议中的指导，每天用新的维护培养基替换旧的培养基。

如有其他问题，请联系我们的科学支持团队。

结论

本文介绍了 Lonza 生物科学解决方案提供的肝细胞解冻和培养方法，并说明了所需的试剂和耗材。遵循协议中的步骤和注意事项，可以成功进行肝细胞的解冻和培养实验。如果需要帮助，请随时联系我们的科学支持团队。

请注意：本节表述仅做了解决方案概述，具体操作请参考协议。

参考资源：

• Lonza 公司网站
• 肝细胞解冻和培养协议