Протокол разморозки и посадки первичных гепатоцитов

Протокол разморозки и посадки первичных гепатоцитов

Содержание

1. Введение
2. Протокол разморозки и посадки первичных гепатоцитов 2.1. Подготовка реагентов и материалов 2.2. Размораживание гепатоцитов 2.3. Подготовка среды для посадки 2.4. Посадка гепатоцитов
3. Подсчет клеток
4. Обслуживание и кормление клеток
5. Заключение

🧪 Протокол разморозки и посадки первичных гепатоцитов

Введение:

Гепатоциты являются важными клетками в исследованиях в области фармакологии и биотехнологии. Они используются для разработки и тестирования лекарственных препаратов. В этом протоколе мы предоставляем инструкции по размораживанию и посадке первичных гепатоцитов для исследовательских целей.

2. Протокол разморозки и посадки первичных гепатоцитов

2.1. Подготовка реагентов и материалов:

Перед началом протокола необходимо подготовить следующие реагенты и материалы:

• Водяная баня с температурой 37 градусов Цельсия.
• Среда для посадки гепатоцитов, подогретая в водяной бане.
• Коническая пробирка с средой для посадки.

2.2. Размораживание гепатоцитов:

• Быстро извлеките криоконсервированные гепатоциты из места их хранения.
• Полностью погрузите виалку с гепатоцитами в водяную баню так, чтобы острие каппы находилось выше уровня воды.
• Размораживайте виалку в течение 90-120 секунд. В идеале должен остаться тонкий спиндл льда.
• Перенесите виалку в биологическую сейфовую камеру и проведите дезинфекцию.

2.3. Подготовка среды для посадки:

• Подготовьте среду для посадки, удалив все образовавшиеся пузыри.
• Пипетируйте 1 миллилитр среды для размораживания обратно в оригинальную виалку.
• Перенесите остальные клетки в коническую пробирку объемом 50 миллилитров с средой для размораживания.
• Тщательно перемешайте пробирку вручную несколько секунд.
• Центрифугируйте пробирку при комнатной температуре согласно указаниям в протоколе.

2.4. Посадка гепатоцитов:

• Перенесите необходимый объем гепатоцитов на коллагенозацированную мультипробирку с помощью 1-миллилитровой пипетки.
• Установите плитку в инкубаторе с углекислым газом при температуре 37 градусов Цельсия.
• Размешивайте плитку в движении с запада на восток, чтобы клетки равномерно распределялись.
• Периодически встряхивайте плитку через 15, 30, 45 и 60 минут после посадки.
• Для 96-х ячеечных плиток заполните ячейки 50 микролитрами среды, затем добавьте 50 микролитров клеток.
• Снимите пластину с инкубатора и осторожно ассоциируйте среду.
• Замените свежей средой для посадки, используя объемы, указанные в протоколе.
• Инкубируйте клетки минимум четыре-шесть часов.

3. Подсчет клеток

Для подсчета клеток используйте метод эксклюзии трипановым синим, чтобы определить жизнеспособность и выход гепатоцитов.

4. Обслуживание и кормление клеток

После посадки и инкубации клеток необходимо регулярно проводить обслуживание и кормление для поддержания их здоровья и роста. Читайте протокол для получения подробной информации о регулярности и объеме замены среды.

5. Заключение

Протокол разморозки и посадки первичных гепатоцитов предоставляет исследователям инструкции по использованию криоконсервированных клеток для проведения различных экспериментов. Следуйте протоколу и обратитесь за помощью к нашей научной поддержке при необходимости.

Highlights:

• Протокол разморозки и посадки первичных гепатоцитов.
• Подготовка реагентов и материалов.
• Размораживание гепатоцитов.
• Подсчет клеток.
• Обслуживание и кормление клеток.

FAQ:

Q: Какие реагенты и материалы необходимы для размораживания и посадки гепатоцитов? A: Для размораживания и посадки гепатоцитов требуются водяная баня, среда для посадки гепатоцитов, коническая пробирка и коллагенозированная мультипробирка.

Q: Как определить жизнеспособность и выход гепатоцитов? A: Для подсчета клеток используйте метод эксклюзии трипановым синим.